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确定合适的Coupling Buffer的实验方法和判断方法有哪些?
为方便实验操作,可以采用原蛋白保存溶液,必须不含有氨基小分子。一般采用PBS或者MES。
抗体中含0.02% NaN3是否需要去除?如何去除?
NaN3虽然会对抗体跟磁珠的结合形成竞争。一般情况下,小于0.05%NaN3的可以忽略不计。如果NaN3含量多,可以采用透析的方法去除。
生物配体例如IgG偶联缓冲液使用什么?
IgG建议使用PBS缓冲液配制。若含有其他伯氨基成分,需透析或超滤去除,避免与磁珠竞争反应。
磁珠共价偶联抗体后,用来纯化蛋白,结合液与洗脱液建议使用什么呢?
结合缓冲液可以使用pH7.4的PBST,洗脱缓冲液可以使用pH2.5的甘氨酸。
Mag NHS和Magrose NHS磁珠怎么选择?
Mag NHS磁珠灵敏度高,用于检测、免疫沉淀实验。
Magrose NHS磁珠载量高,用于纯化方向。
配体偶联需要注意什么?
a.需确保配体保存体系中不含其他伯氨基成分(例如Tris、BSA、明胶等),如有,需透析或超滤去除。
b.偶联蛋白一般使用 0.1-3.0 mg/mL 的蛋白溶液,浓度越高偶联效率越高。
需要偶联抗体或其他蛋白配体,之后进行目的蛋白的纯化,用哪款比较合适?
Magrose COOH或NHS磁珠更适合,因为其多孔材质、良好的生物相容性、巨大的比表面积、更高的配体偶联量,更适合纯化领域。
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