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确定合适的Coupling Buffer的实验方法和判断方法有哪些?
为方便实验操作,可以采用原蛋白保存溶液,必须不含有氨基小分子。一般采用PBS或者MES。
抗体中含0.02% NaN3是否需要去除?如何去除?
NaN3虽然会对抗体跟磁珠的结合形成竞争。一般情况下,小于0.05%NaN3的可以忽略不计。如果NaN3含量多,可以采用透析的方法去除。
生物配体例如IgG偶联缓冲液使用什么?
IgG建议使用PBS缓冲液配制。若含有其他伯氨基成分,需透析或超滤去除,避免与磁珠竞争反应。
磁珠共价偶联抗体后,用来纯化蛋白,结合液与洗脱液建议使用什么呢?
结合缓冲液可以使用pH7.4的PBST,洗脱缓冲液可以使用pH2.5的甘氨酸。
偶联蛋白或抗体时,合适的蛋白投入量是?
Mag NHS的IgG偶联量为30μg/mg磁珠。取1mg磁珠作为反应量时,加入IgG的量常为50μg左右。配制IgG溶液的体积越少越好,但要保证磁珠能够分散。
配体偶联需要注意什么?
a.需确保配体保存体系中不含其他伯氨基成分(例如Tris、BSA、明胶等),如有,需透析或超滤去除。
b.偶联蛋白一般使用 0.1-3.0 mg/mL 的蛋白溶液,浓度越高偶联效率越高。
1μm的磁珠每mg的磁珠个数有多少?
1mg磁珠约有10^8个。
1μm羧基磁珠的羧基臂长是多少?
1μm羧基磁珠的羧基臂长为6个碳碳单键。
配置EDC和NHS溶液时,MEST需要预冷么?EDC可以使用盐酸形式的EDC(EDC·HCl)么?
MEST不需要预冷。
EDC可以使用EDC·HCl。
1um磁珠(70104)的抗体偶联量为多少?
抗体偶联量约25-30μg/mg磁珠。
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